%0 Thesis %T Chronic lymphocytic leukemia and the microenvironment: Stimulation of the B cell receptor and regulation of CXCR4 membrane expression by protein kinases D %T Leucémie lymphoïde chronique et microenvironnement : Stimulation du récepteur B à l'antigène et régulation de l'expression membranaire du CXCR4 par les protéine kinases D %+ Signalisation, Microenvironnement et Hémopathies Lymphoïdes B (SIMHEL) %A Saint-Georges, Stéphane %Z Allocation doctorale Université Paris 13 %I Université Paris 13 %Y Dominique Ledoux %8 2013-12-05 %D 2013 %K CLL %K microenvironment %K lymp nodes %K BCR %K CXCR4 %K CD62L %K PI3K %K PKD %K LLC %K LB %K Microenvironnement %K Ganglion %K BCR %K CXCR4 %K CD62L %K PI3K %K PKD %Z Life Sciences [q-bio]Theses %X Chronic Lymphocytic Leukaemia (CLL) progression involves enlargement of lymph nodes due to anaccumulation of CLL B cells into the nodal microenvironment. The crucial role of the antigenic stimulationthrough the B cell receptor (BCR) in normal B cell trafficking into the lymph nodes suggests that BCRengagement might be implicated in the CLL B cell retention/accumulation into the lymphatic compartment. Inthis context, we focused our efforts on the study of the impact of an in vitro antigenic stimulation on theexpression of key effectors involved in CLL B trafficking.First, we demonstrated that BCR stimulation decreased CXCR4- and CD62L-membrane expressions; thisdecrease was associated to an in vitro reduction of CLL B cell migration and adhesion. Moreover, the intensityof CXCR4- and CD62L- down-regulation upon BCR stimulation was linked to unfavourable prognostic markersand correlated to CLL patients’ progression free survival.Next, we analysed the activated BCR signalling cascades that were involved in CXCR4 internalisation ofCLL B cells. The LY294002/CAL101-PI3K and Gö6976/CID755673-PKD inhibitors blocked BCR-dependentCXCR4 down-regulation, revealing the role of the PKDs in this process. Functionally, BCR triggering inducedPKD2/3 phosphorylation/activation in a PI3K-dependent manner. Interestingly, the level of the phospho-PKD2/3induction was correlated to the intensity of BCR-dependent CXCR4 down-regulation. Furthermore, BCRengagement allowed CXCR4 phosphorylation on specific residues involved in its internalisation, suggesting thatCXCR4 endocytic process was partially regulated by PKDs.Altogether, our results demonstrated the PI3K and PKD implications on cell surface CXCR4 downregulationin response to BCR stimulation. These data proposed that PI3K and PKDs could play a role in thealtered lymphatic trafficking of CLL B cells upon BCR engagement %X L’évolutivité de la Leucémie Lymphoïde Chronique (LLC) se caractérise par la présence d’adénopathierésultant d’une accumulation de lymphocytes B (LB) pathologiques au sein du microenvironnementganglionnaire. La stimulation antigénique joue un rôle important dans le trafic intra-ganglionnaire des LBsuggérant qu’elle puisse jouer un rôle dans la rétention/accumulation des LB pathologiques au sein desganglions. Dans ce contexte nous avons étudié l’impact in vitro de la stimulation antigénique des cellules deLLC sur l’expression d’effecteurs clés du trafic ganglionnaire des LB.Nous avons d’abord montré que la stimulation du récepteur B à l’antigène (BCR) entraine une diminutionde l’expression membranaire du CXCR4 et du CD62L associée à une diminution de la migration et de l’adhésionin vitro des LB de LLC. De plus, l’intensité de la down-régulation du CXCR4 et du CD62L en réponse à lastimulation du BCR est associée à des marqueurs de mauvais pronostique et corrélé à la survie sans progressiondes patients LLC.Nous avons ensuite analysé les voies de signalisation activées en aval du BCR et impliquées dansl’internalisation du CXCR4 dans les LB de LLC. L’utilisation d’inhibiteurs de la PI3K (LY294002, CAL101) etdes protéines kinases D (Gö6976, CID755673) entraîne une inhibition complète de la down-régulation duCXCR4 dépendante de la stimulation du BCR, révélant un rôle de ces kinases dans ce processus. D’un point devue fonctionnel, la stimulation du BCR induit une phosphorylation/activation des PKD2 et/ou PKD3 de manièredépendante de la PI3K et le taux d’induction de la phosphorylation des PKD2/3 est corrélé à l’intensité de downrégulationdu CXCR4. Enfin, l’activation du BCR induit une phosphorylation du CXCR4 sur des résidusimpliqués dans l’internalisation du récepteur, suggérant que ce processus d’endocytose est en partie placé sous lecontrôle des PKD.En conclusion, nos résultats ont permis de mettre en évidence une implication de la PI3K et des PKD dansla down-régulation du CXCR4 membranaire en réponse à une activation du BCR. Ces données suggèrent que cesprotéines pourraient jouer in vivo un rôle dans la perturbation du trafic ganglionnaire des LB de LLC en réponseà la stimulation antigénique. %G French %L tel-03948859 %U https://sorbonne-paris-nord.hal.science/tel-03948859 %~ UNIV-PARIS13 %~ ASIH %~ SORBONNE-PARIS-NORD %~ SIMHEL